Сбор образцов для случаев подозрения свинки
Если с момента появления симптомов прошло менее 3 дней, соберите образец мазка из щеки для обнаружения вирусной РНК с помощью RT-КПЦР. Если прошло более 3 дней с момента появления симптомов, соберите образец мазка из ротовой полости для RT-qPCR и образец сыворотки для определения IgM. Если у пациента есть орхит / оофорит, мастит, панкреатит, потеря слуха, менингит или энцефалит, соберите буккальный образец для RT-qPCR, образец мочи для RT-qPCR и образец сыворотки для определения IgM, независимо от дней после появления симптомов начало.
В начале предполагаемой вспышки эпидемического паротита пациенты, подозреваемые на эпидемический паротит, должны пройти тестирование с помощью RT-КПЦР для подтверждения паротита и исключения других возможных этиологий. Однако после подтверждения вспышки эпидемического паротита юрисдикциям следует рассмотреть альтернативные стратегии для обеспечения эффективного использования ресурсов, доступных для лабораторных испытаний.
В клиническом определении CSTE для эпидемического паротита подтверждены случаи с положительным результатом ОТ-ПЦР, а случаи с положительным IgM классифицируются как вероятные.
Отгрузка образцов для подозреваемых случаев свинки
Пожалуйста, свяжитесь с отделом здравоохранения вашего штата, чтобы определить, куда подавать образцы и как их отправлять.
Если вы получили указание отправить образцы в CDC из США, вы должны использовать форму представления образцов CDC (50.34). Пожалуйста, предоставьте форму для подачи каждого образца.
Пожалуйста, не забудьте указать следующую информацию:
- Контактное лицо с номером телефона и адресом электронной почты
- Идентификатор случая и идентификатор образца из подающей лаборатории, связанные с образцом
- Тип собранного образца
- Дата сбора образцов
- История прививок MMR [дата (даты), если известны]
- Клинические признаки и симптомы
- Дата рождения или возраст пациента
- Дата начала паротита или припухлости челюсти, если применимо
- Любые предыдущие результаты испытаний (если известны)
Доставка до:
Центры по контролю и профилактике заболеваний
СТАТ Блок № 81
Внимание: доктор Пол Рота
1600 Clifton Road NE
Атланта, GA 30329
Свяжитесь с Полом Рота по телефону 404-639-4181 или по электронной почте на адрес электронной почты [для защиты электронной почты] для получения дополнительной информации и предоставления сведений об отправке.
Оральные или буккальные мазки
Видео: «Сбор клинического образца щечной мазки для диагностики паротита».
Это короткое видео демонстрирует, как правильно собирать и транспортировать щечный тампон (предпочтительный образец) для обнаружения РНК вируса паротита.
Как только появится подозрение на эпидемический паротит, соберите образцы мазков из ротовой полости или ротовой полости. ОТ-ПЦР имеет наибольшую диагностическую чувствительность, когда образцы собирают с 3 днями появления симптомов.
Образцы мазков в ротовой полости или в полости рта получают путем массажа области околоушной железы в течение 30 секунд, прежде чем помазать область вокруг протока Стенсена. Можно использовать коммерческий продукт, предназначенный для сбора образцов горловины или ворсистого тампона из полиэфирного волокна. Синтетические тампоны предпочтительнее ватных тампонов, которые могут содержать вещества, которые ингибируют ферменты, используемые в ОТ-ПЦР. Флокированные синтетические тампоны кажутся более абсорбирующими и элюируют образцы более эффективно.
Обработка тампонов в течение 24 часов после сбора улучшит чувствительность методов ОТ-ПЦР и выделения вируса.
Мазки следует помещать в 2 мл стандартной вирусной транспортной среды (VTM) [1]. Оставьте тампон в VTM минимум на 1 час (4 ° C). Поверните тампон вокруг края трубки, чтобы сохранить клетки и жидкость в трубке. Мазок можно разорвать и оставить в пробирке или выбросить.
Хранение и отгрузка: После сбора образцы должны храниться при 4 ° C и отправляться на холодные упаковки (4 ° C) в течение 24 часов. Если имеется задержка при отгрузке, образец лучше всего хранить путем замораживания при -70 ° C. Замороженные образцы следует отправлять на сухом льду.
Образцы мочи
Моча не является оптимальным образцом для RT-КПЦР и не является предпочтительной в качестве образца для пациентов с паротитом, даже для тех пациентов, у которых более 3 дней после появления симптомов (Jin et al, 2007, Tan et al, 2011, Maillet et al, 2015, L'huillier et al, 2018, Krause et al, 2006, Hatchette et al, 2009, Nunn et al, 2018). Тестирование мочи во время вспышки не значительно увеличивает диагностическую ценность и может отрицательно повлиять на ресурсы тестирования.
Тем не менее, у пациентов с осложнениями паротита (орхит, оофорит, нефрит, энцефалит, менингит) сбор образца мочи в дополнение к оральному образцу может помочь подтвердить паротитную инфекцию.
Получение мочи у пациентов с осложнениями может привести к лучшему пониманию полезности мочи в качестве образца для RT-КПЦР в этих случаях.
Минимальный объем 50 мл мочи должен быть собран в стерильный контейнер и затем обработан центрифугированием при 2500 × g в течение 15 минут при 4 ° C. Осадок следует ресуспендировать в 2 мл VTM.
Хранение и отгрузка: Храните осадок мочи в VTM при 4 ° C и, если возможно, отправляйте его в холодных упаковках в течение 24 часов. Наилучший метод сохранения вируса паротита в обработанной (центрифугированной) моче - заморозить образец при -70 ° C и отправить его на сухой лед. Смотрите информацию о доставке, в том числе, куда отправлять образцы для тестирования.
Серология (образцы сыворотки)
Если прошло более 3 дней после появления симптомов, соберите 7-10 мл крови в пробирку с красными пробирками или сывороткой (SST) для определения IgM. Центрифуга пробирки для сбора крови (10 мин при 2200 - 2500 об / мин) для отделения сыворотки от сгустка. Пробирки для отделения геля следует центрифугировать не позднее, чем через 2 часа после сбора. В асептических условиях переносите сыворотку в стерильную пробирку с крышкой с наружной резьбой и уплотнительным кольцом. Храните образцы при температуре 4 ° C и отправляйте их на влажные пакеты со льдом. Не замораживайте пробирки с цельной кровью. Гемолизированная и липемическая сыворотка и плазма отмечаются и тестируются, как правило, без видимых помех.
Если образец сыворотки, собранный через 3 дня после начала паротита, имеет отрицательный IgM, и случай имеет отрицательный (или не сделанный) результат для ОТ-КПЦР, и существует сильное подозрение на паротит, вторая проба сыворотки, собранная через 5-10 дней после Начало симптомов рекомендуется, потому что в некоторых случаях ответ IgM не обнаруживается до 5 дней после появления симптомов.
Один образец сыворотки, проверенный на специфический IgG против эпидемического паротита, не подходит для диагностики острых паротитных инфекций. Повышение или сероконверсия в четыре раза редко наблюдается между парными образцами сыворотки для паротита, поскольку IgG обычно присутствует в начале симптомов (см. FAQ по серологии).
Ссылки
- Hatchette TF, Махони Дж. Б., Чонг С., Леблан Дж. Трудность с диагнозом эпидемического паротита: каков вклад имитатора эпидемического паротита? J Clin Virol 2009; 46: 381-3.
- Джин Л., Фенг Й., Парри Р., Цуй А., Лу Ю. ПЦР в реальном времени и ее применение для быстрой диагностики паротита. J Med Virol 2007; 79: 1761-7.
- Краузе Ч., Истик К, Огилви М. М. ПЦР в реальном времени для диагностики паротита по клиническим образцам - сравнение с результатами традиционных методов обнаружения вирусов и гнездовой ПЦР. J Clin Virol 2006; 37: 184-9.
- L'Huillier AG, Eshaghi A, Racey CS, et al. Лабораторные исследования и филогенетический анализ во время эпидемического паротита в Онтарио, Канада. Virol J 2018; 15:98.
- Maillet M, Bouvat E, Robert N, et al. Вспышка эпидемического паротита и лабораторная диагностика. J Clin Virol 2015; 62: 14-9.
- Нанн А., Масуд С., Крайден М., Наус М., Яссем А. Н. Диагностический выход лабораторных методов и значение вирусного генотипирования во время вспышки эпидемического паротита в частично вакцинированной популяции в Британской Колумбии, Канада. J Clin Microbiol 2018; 56.
- Тан К. Е., Андерсон М., Крайден М., Петрик М., Мак А., Наус М. Обнаружение вируса паротита во время вспышки среди крайне непривитой популяции в Британской Колумбии. Can J Public Health 2011; 102: 47-50.
сноска
[1] Можно использовать среду для культивирования клеток (минимальная необходимая среда или сбалансированный солевой раствор Хенкса) или другой стерильный изотонический раствор (например, забуференный фосфатом физиологический раствор). Присутствие белка, например 1% бычьего альбумина, 0, 5% желатина или 2% сыворотки, стабилизирует вирус. Образцы без источника белка в среде потеряют 90-99% инфекционности в течение 2 часов при 4 ° C.
Верх страницы
Связанные страницы
- Секция лабораторных испытаний: Руководство по надзору за болезнями, предупреждаемыми с помощью вакцин: Свинка
- Иллюстрация околоушной железы и инструкция по сбору буккальной жидкости
- Вопросы и ответы о лабораторном тестировании